INMUNODIAGNOSTICO

EQUIPO NO. 3

NOVIEMBRE/2010

ANTECEDENTES HISTORICOS
*El mtodo nefelometrico se ha descrito desde 1914, pero los resultados obtenidos con la instrumentacin de la poca disminuyeron su uso.

*1947 .Boyden mostr la curva de precipitacin midiendo turbiedad en mezclas Ag-Ac.

*1950. Schultze y Suhwich describieron mediciones turbidimetrcas de varias protenas plasmticas. *1967. Algunos reportes demostraron la eficacia del mtodo en soluciones a baja concentracin (Ag-Ac). *Posteriormente el laboratorio de la Universidad de Carolina del Norte dieron a conocer un instrumento nefelometrico ,cuya fuente de luz es un lser de HelioNen.

Nefelometra: Principios
Cuando un haz de luz choca contra una partcula en suspensin sufre una serie de fenmenos:
DISPERSIN DE LA LUZ REFLEXIN ABSORCIN TRANSMISIN

La DISPERSIN de la luz depende de varios factores, que son:

Tamao y peso molecular de las partculas Longitud de onda de la luz incidente

Distancia del detector a la cubeta

Concentracin de partculas

FUNDAMENTOS DEL SISTEMA NEFELOMETRICO

FUNDAMENTO QUIMICO. El sistema tiene como fuente de luz un laser Helio-Nen con una Longitud de onda de 632.8 nm,el rayo pasa a travs de una barrera ptica hacia la celda en donde se encuentran las partculas (complejos Ag-Ac) que van a ser cuantificadas, la luz esparcida por ellas es dirigida por un sistema de lentes hacia un fotodetector. La intensidad de la luz desviada es proporcional a la concentracin de partculas dispersantes en la muestra.

El rayo laser es monocromtico, extremadamente intenso.

unidireccional

FUNDAMENTO INMUNOLOGICO

Cuando el rayo penetra en un liquido en donde se encuentren en suspensin complejos inmunes, este sufrir una desviacin con respecto al ngulo de incidencia y dependiendo de las caracterstica fsicas del complejo , ser el comportamiento de la desviacin luminosa.

FORMAS DE DIFUSION

Fig 1
Si la partcula tiene un dimetro menor a la Long. De onda ,

la desviacin de la luz se efectuara en todas direcciones.(ley de Rayleigh)Fig.1

La nefelometra es una tcnica que permite determinar niveles de antgeno o de anticuerpo en soluciones a muy baja concentracin. La nubosidad o turbidez que producen los pequeos inmunocomplejos es medida por la luz que se dispersa, a travs de un fotodetector que est en un ngulo diferente a la fuente de luz incidente (30 a 90). Se puede obtener una gran sensibilidad usando luz monocromtica de un rayo lser .

NEFELOMETRO

El instrumental incluye: Fuente de luz (energa radiante), Colimador (lente o espejo), Monocromador (filtros, , prismas, redes de difraccin), Cubeta= espectrofotometra y Sistema de deteccin

La eleccin de la nefelometra viene dada por dos factores:

Intensidad de la radiacin transmitida o dispersada con la intensidad de la radiacin procedente de la fuente. Por lo que la mejor eleccin cuando la muestra contiene pocas partculas dispersantes es la nefelometra.
Tamao de las partculas dispersantes. En la nefelometra la intensidad de la radiacin dispersada a 90 es mayor si las partculas son bastante pequeas para que se produzca una dispersin Rayleigh.

 Este procedimiento se utiliza para medir molculas que se

encuentran en concentraciones situadas entre 10-4 y 10-9 mol/l, sin embargo con los procedimientos nefelometricos es posible la deteccin de concentraciones cercanas a 10-12 mol/l, lo que permite la medicin de hormonas y ciertas protenas presentes en el suero en escasa concentracin.

 La nefelometra requiere de soluciones diluidas, ya que la

potencia radiante dispersada por las partculas en solucin debe compararse con la radiacin de fondo, al ser la potencia de la radiacin detectada directamente proporcional a la concentracin de masa de partculas.
Los

mtodos nefelometricos poseen en teora mayor detectabilidad y sensibilidad metrologica que los turbidimetricos.

CUANDO PODEMOS HACER UNA NEFELOMETRIA Nefelometra cuantitativa

Es un examen para medir en forma rpida y precisa el nivel especfico de ciertas protenas, llamadas inmunoglobulinas, en la sangre. Especficamente, este examen busca las protenas IgM, IgG e IgA. La reaccin que se produce es: Ag-Ac

Razones por las que se realiza el examen El examen proporciona una medicin rpida y precisa de las cantidades de inmunoglobulinas M, G y A.

Su medicin permite establecer un pronstico (enfermedad benigna o maligna), mantener un control evolutivo del tratamiento y detectar precozmente el inicio de una inmunodeficiencia.

SIGNIFICADO DE LOS RESULTADOS ANORMALES

IgG
Infeccin o inflamacin crnicas

IgG
Leucemia

IgM
Mononucleosis infecciosa

IgM
Leucemia

IgA
Infecciones crnicas, que comprometen especialmente el tracto gastrointestinal

IgA
Deficiencia hereditaria de IgA

Enfermedad heptica

Mieloma

Linfoma

Agamaglobulinemia

Enfermedad intestinal inflamatoria

Gastroenteropata por prdida de protenas

Artritis reumatoide

Preeclampsia

Macroglobulinemia

Mieloma

Mieloma

Valores normales IgG: 560 a 1800 mg/dl IgM: 45 a 250 mg/dl IgA: 100 a 400 mg/dl

PARMETROS DETERMINADOS POR ESTA TCNICA

INMUNOGLOBULINA A INMUNOGLOBULINA G INMUNOGLOBULINA M CADENAS LIGERAS totales k CADENAS LIGERAS totales l Fraccin COMPLEMENTO 3

Fraccin COMPLEMENTO 4

Algunos de los presentes parmetros se determinan, adems de en suero , orina, LCR y otros lquidos orgnicos.

En el laboratorio clnico se est usando masivamente por sus ventajas en la cuantificacin de protenas, como: un mtodo rpido, altamente automatizado, simple de operar, usa pequeos volmenes de muestra y reactivo, alta sensibilidad (menor que 1 ng/litro) y excelente precisin.